ProteanFect™ CRISPRMax 基因编辑转染试剂盒在人源原代 T 细胞中实现高效 TRAC 基因编辑
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ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒在ProteanFect Max系列产品中专门用于原代细胞与难转细胞系基因编辑。ProteanFect基于自组装蛋白纳米颗粒,为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂。ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒能够更高效且安全地将基因编辑工具递送至细胞内,进而实现高效的基因编辑。仅供研究使用。
Number | Standard | Price(USD) | Stock |
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PT05-0010A | 0.1 mL | 5108 | 现货 |
PT05-0020A | 0.2 mL | 9098 | 现货 |
PT05-0050A | 0.5 mL | 17198 | 现货 |
PT05-0100A | 1.0 mL | 27198 | 现货 |
PT05-0500A | 5.0 mL | 119198 | 现货 |
ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒采用干冰运输,收货后需存放于推荐储存温度下直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品,其中含有编码绿色荧光蛋白(EGFP)的 mRNA,可用于验证实验操作流程和转染效率;同时还有靶向人TRAC 基因的 sgRNA,以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后,为保障试剂性能处于最佳状态,各组分应依据表中所列存储条件妥善存放。
Components | Storage |
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Reagent A (for CRISPR/Cas9) | 打开使用后,保存于2-8℃ |
Reagent B (for CRISPR/Cas9) | 保存于-20℃,避免反复冻融 |
Reagent C (for CRISPR/Cas9) | 打开使用后,保存于2-8℃ |
Cas9 mRNA (1 µg/µL) | 保存于-80℃,避免反复冻融 |
EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃,避免反复冻融 |
Human TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃,避免反复冻融 |
干冰低温运输
使用ProteanFect™ CRISPRMax Cas9 基因编辑转染试剂盒成功编辑的细胞类型包括:
Cell lines | Tested Nucleic Acid Types for Transfection |
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人原代T细胞 | sgRNA |
人原代NK细胞 | sgRNA |
人原代单核细胞 | sgRNA |
IPSC(诱导多能干细胞细胞) | sgRNA |
人原代CD34+造血干细胞 | sgRNA |
小鼠原代神经元 | sgRNA |
小鼠原代神经少突胶质细胞 | sgRNA |
小鼠原代心肌细胞 | sgRNA |
大黄鱼原代间充质干细胞 | sgRNA |
Jurkat T(人T淋巴细胞白血病细胞) | sgRNA |
LX-2(人肝星状细胞) | sgRNA |
HepG2(人肝肿瘤细胞) | sgRNA |
THP-1(人急性单核细胞白血病细胞系) | sgRNA |
Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞) | sgRNA |
K562(人慢性粒细胞白血病细胞) | sgRNA |
MOLT-16 (人T淋巴细胞白血病细胞) | sgRNA |
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞系) | sgRNA |
U2OS(人骨肉瘤细胞) | sgRNA |
U937(人类淋巴瘤细胞) | sgRNA |
HFF(人皮肤成纤维细胞) | sgRNA |
HEK-293(人胚胎肾细胞系) | sgRNA |
H1(人胚胎干细胞系) | sgRNA |
MC38(小鼠结肠癌细胞) | sgRNA |
RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | sgRNA |
LLC(小鼠Lewis肺癌细胞) | sgRNA |
C2C12(小鼠成肌细胞) | sgRNA |
COS7(猴肾细胞系) | sgRNA |
Scheme | Step | ProteanFect CRISPRMax Cas9转染原代细胞的实验操作步骤说明(以96孔板体系为例) |
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1. 配置ProteanFect转染体系 |
1.1 将Reagent A (for CRISPR/Cas9) 与mRNA混合:在40 µL Reagent A (for CRISPR/Cas9)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA,充分混匀(Reagent A使用前需颠倒混匀) 1.2 加入Reagent B (for CRISPR/Cas9)轻柔充分混匀:往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B (for CRISPR/Cas9)混匀 1.3 加入Reagent C (for CRISPR/Cas9)混匀:往上述混合物中加入13.5 μL Reagent C (for CRISPR/Cas9)混匀 |
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2. 细胞处理(转染液制备完成后再准备待转细胞) |
2.1 悬浮细胞准备(尽量去除FBS,以免影响转染效果):取待转染细胞,300 g离心5分钟,收集细胞沉淀,去上清,加入Opti-MEM(提前预热或恢复至室温)重悬并洗涤,调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备(尽量去除FBS,以免影响转染效果):转染前汇合率应保持在50%-80%;弃去培养基后,用Opti-MEM(提前预热或恢复至室温)轻柔清洗细胞两次,并加入20 µL Opti-MEM备用 |
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3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞:将上述配置好的 ProteanFect转染体系与20 µL细胞悬液(可直接在离心管中孵育)或贴壁细胞混合均匀 3.2 孵育:37℃培养箱孵育15分钟 3.3 终止反应与洗涤:加入至少200 µL完全培养基,300 g离心5分钟,弃上清(为避免细胞损失,无需完全弃尽);对于贴壁细胞,直接弃去混合液,补加培养基 3.4 细胞培养与观察:加入适量完全培养基,进行细胞培养,72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
Scheme | Step | ProteanFect CRISPRMax Cas9转染细胞系的实验操作步骤说明(以96孔板体系为例) |
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1. 配置ProteanFect转染体系 |
1.1 将Reagent A (for CRISPR/Cas9) 与mRNA混合:在40 µL Reagent A (for CRISPR/Cas9)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA,充分混匀(Reagent A使用前需颠倒混匀) 1.2 加入Reagent B (for CRISPR/Cas9)轻柔充分混匀:往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B (for CRISPR/Cas9)混匀 |
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2. 细胞处理(转染液制备完成后再准备待转细胞) |
2.1 悬浮细胞准备(尽量去除FBS,以免影响转染效果):取待转染细胞,300 g离心5分钟,收集细胞沉淀,去上清,加入Opti-MEM(提前预热或恢复至室温)重悬并洗涤,调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备(尽量去除FBS,以免影响转染效果):转染前汇合率应保持在50%-80%;弃去培养基后,用Opti-MEM(提前预热或恢复至室温)轻柔清洗细胞两次,并加入20 µL Opti-MEM备用 |
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3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞:将上述配置好的 ProteanFect转染体系与20 µL细胞悬液(可直接在离心管中孵育)或贴壁细胞混合均匀 3.2 孵育:37℃培养箱孵育45-60分钟 3.3 终止反应与洗涤:加入至少200 µL完全培养基,300 g离心5分钟,弃上清(为避免细胞损失,无需完全弃尽);对于贴壁细胞,直接弃去混合液,补加培养基 3.4 细胞培养与观察:加入适量完全培养基,进行细胞培养,72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |