ProteanFect™ CRISPRMax 基因编辑转染试剂盒在人源原代 T 细胞中实现高效 TRAC 基因编辑
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ProteanFect™ CRISPRMax Cas9 基因编辑转染试剂盒
ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒在ProteanFect Max系列产品中专门用于原代细胞与难转细胞系基因编辑。ProteanFect基于自组装蛋白纳米颗粒，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂。ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒能够更高效且安全地将基因编辑工具递送至细胞内，进而实现高效的基因编辑。仅供研究使用。
| Number | Standard | Price(USD) | Stock |
|---|---|---|---|
| PT05-0010A | 0.1 mL | 5108 | 现货 |
| PT05-0020A | 0.2 mL | 9098 | 现货 |
| PT05-0050A | 0.5 mL | 17198 | 现货 |
| PT05-0100A | 1.0 mL | 27198 | 现货 |
| PT05-0500A | 5.0 mL | 119198 | 现货 |
Transfection Performance
Documents
Product Information
Components & Storage
ProteanFect CRISPRMax Cas9基因编辑转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于推荐储存温度下直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向人TRAC 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据表中所列存储条件妥善存放。
| Components | Storage |
|---|---|
| Reagent A (for CRISPR/Cas9) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B (for CRISPR/Cas9) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C (for CRISPR/Cas9) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Cas9 mRNA (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Human TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
Shipping Information
干冰低温运输
Compatible Cell Lines
使用ProteanFect™ CRISPRMax Cas9 基因编辑转染试剂盒成功编辑的细胞类型包括：
| Cell lines | Tested Nucleic Acid Types for Transfection |
|---|---|
| 人原代T细胞 | sgRNA |
| 人原代NK细胞 | sgRNA |
| 人原代单核细胞 | sgRNA |
| IPSC(诱导多能干细胞细胞) | sgRNA |
| 人原代CD34+造血干细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代神经元 | sgRNA |
| 小鼠原代神经少突胶质细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代心肌细胞 | sgRNA |
| 大黄鱼原代间充质干细胞 | sgRNA |
| Jurkat T（人T淋巴细胞白血病细胞） | sgRNA |
| LX-2（人肝星状细胞） | sgRNA |
| HepG2（人肝肿瘤细胞） | sgRNA |
| THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系） | sgRNA |
| Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| K562（人慢性粒细胞白血病细胞） | sgRNA |
| MOLT-16 （人T淋巴细胞白血病细胞） | sgRNA |
| SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞系） | sgRNA |
| U2OS（人骨肉瘤细胞） | sgRNA |
| U937（人类淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| HFF（人皮肤成纤维细胞） | sgRNA |
| HEK-293（人胚胎肾细胞系） | sgRNA |
| H1（人胚胎干细胞系） | sgRNA |
| MC38（小鼠结肠癌细胞） | sgRNA |
| RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞） | sgRNA |
| LLC（小鼠Lewis肺癌细胞） | sgRNA |
| C2C12（小鼠成肌细胞） | sgRNA |
| COS7（猴肾细胞系） | sgRNA |
Product Data
Transfection Protocol for mRNA per Well of a 96-Well Plate
| Scheme | Step | ProteanFect CRISPRMax Cas9转染原代细胞的实验操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
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1. 配置ProteanFect转染体系 |
1.1 将Reagent A (for CRISPR/Cas9) 与mRNA混合：在40 µL Reagent A (for CRISPR/Cas9)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B (for CRISPR/Cas9)轻柔充分混匀：往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B (for CRISPR/Cas9)混匀 1.3 加入Reagent C (for CRISPR/Cas9)混匀：往上述混合物中加入13.5 μL Reagent C (for CRISPR/Cas9)混匀 |
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2. 细胞处理（转染液制备完成后再准备待转细胞） |
2.1 悬浮细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：取待转染细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）重悬并洗涤，调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）轻柔清洗细胞两次，并加入20 µL Opti-MEM备用 |
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3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞：将上述配置好的 ProteanFect转染体系与20 µL细胞悬液（可直接在离心管中孵育）或贴壁细胞混合均匀 3.2 孵育：37℃培养箱孵育15分钟 3.3 终止反应与洗涤：加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽）；对于贴壁细胞，直接弃去混合液，补加培养基 3.4 细胞培养与观察：加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
| Scheme | Step | ProteanFect CRISPRMax Cas9转染细胞系的实验操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
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1. 配置ProteanFect转染体系 |
1.1 将Reagent A (for CRISPR/Cas9) 与mRNA混合：在40 µL Reagent A (for CRISPR/Cas9)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B (for CRISPR/Cas9)轻柔充分混匀：往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B (for CRISPR/Cas9)混匀 |
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2. 细胞处理（转染液制备完成后再准备待转细胞） |
2.1 悬浮细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：取待转染细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）重悬并洗涤，调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）轻柔清洗细胞两次，并加入20 µL Opti-MEM备用 |
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3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞：将上述配置好的 ProteanFect转染体系与20 µL细胞悬液（可直接在离心管中孵育）或贴壁细胞混合均匀 3.2 孵育：37℃培养箱孵育45-60分钟 3.3 终止反应与洗涤：加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽）；对于贴壁细胞，直接弃去混合液，补加培养基 3.4 细胞培养与观察：加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
Technical FAQ
转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常原代细胞不超过30分钟，细胞系不超过2小时。2）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。
1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。
对于原代细胞，充分活化有助于提高转染效率，因此建议在适当活化后进行转染。例如，人原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-10天内均可转染，其中激活4-6天时转染效率最高。（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的转染攻略→人原代T）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。为节省细胞和试剂，使用96孔板的细胞量即可，转染体系中EGFP mRNA的用量为0.5 μg。
ProteanFect具有较高的核酸加载量，可同时转染多个核酸，不会影响转染效率，且共表达率为90%以上。因此我们推荐将EGFP mRNA和Cas9 mRNA／sgRNA共转。推荐使用量，以96孔细胞数为例，0.2 μg Cas9 mRNA、0.2 μg sgRNA、0.1 μg EGFP mRNA，EGFP的阳性率可以指示转染效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，推荐使用离心管进行孵育，转染体系参照说明书表3，不会影响转染效率。
对于贴壁细胞，可提前一天种板后进行转染，也可消化成细胞悬液进行悬浮转染。具体操作参照说明书表2。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。