ProteanFect转染试剂盒

转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常原代细胞不超过1小时，细胞系不超过2小时。2）提升Reagent B用量：适当增加Reagent B的用量，以96孔板为例，细胞系推荐为1-3 μL，根据具体情况进行调整。3）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。

多数细胞系经过多代培养后，能够更有效地应对外源DNA的压力，对双链DNA的转染耐受性较高，因此通常可使用质粒DNA进行转染。然而，一些细胞系仍可能对双链DNA较为敏感，导致转染过程中产生毒性反应，如炎症应激。因此，实验中应根据具体细胞系的特性及研究目的选择合适的转染策略。以THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系）和Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞系）为例，它们不适合使用质粒DNA进行转染。

转染效率受DNA质量影响。建议使用无内毒素试剂盒制备DNA，并确保OD值在1.7-1.9之间；使用无核酸酶纯水将DNA稀释至0.5-2 µg/µL的浓度。

1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。

首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA或EGFP pDNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。

说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。

转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。

对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。

如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。